
做过实验的小伙伴都清楚,融合孔经间接ELISA阳筛后需尽快进行亚克隆,此举的好处是防止融合孔里非分泌抗体的杂交瘤细胞形成生长优势而压制分泌抗体的特异性杂交瘤细胞的生长。
注:相较分泌抗体的特异性杂交瘤细胞而言,非分泌抗体的杂交瘤细胞更易于“轻装上阵”,因此很容易形成生长优势。
此时一个不容忽视的问题是融合孔里的细胞生长状态差,不少孔里培养基颜色已经由红色转变为黄色。在此偏酸性环境下细胞非常脆弱,稍有不慎(包括但不局限于枪头吹打细胞过猛、用于亚克隆的培养基营养组分不够充分或没有添加细胞增殖因子)则有可能辛辛苦苦筛得的阳性融合孔却在后续的亚克隆过程中要么细胞不长,要么就是克隆转阴。鉴于以上种种问题,本公司潜心研发,测试、评价、筛选了多种利于杂交瘤单细胞状态恢复、增殖、成团的添加因子及条件培养基,将这些关键组分添加至完全培养基(通常是DMEM或1640+血清+双抗)后能够极高效、极便捷、极稳定的促进杂交瘤亚克隆铺板后单细胞的成活与生长。而且本公司的添加因子里还加入了B细胞刺激因子,能够调节细胞通路,促进在同等的培养时限里有更多抗体的分泌和表达,此举大大拓宽了有限的亚克隆上清同时用于多种下游时的检测需求(比如杂交瘤上清需同进行人蛋白、猴蛋白交叉筛选或阻断筛选等)。
产品信息 | |
中文名称 | 高性能杂交瘤扩培及亚克隆专用培养基 |
英文名称 | High-Performance Hybridoma expand and subclone special medium |
货号 | Abt-M102-HESSM |
规格 | 500ml/瓶 |
产品组分 | DMEM基础培养基:80%(体积比) 进口胎牛血清:10%(体积比) 条件培养基:10%(体积比) 青霉素:100 单位/mL 链霉素:100 单位/mL 其它添加物:单细胞增殖因子及小分子添加剂 |
保存条件 | -20℃避光保存,有效期18个月。 |
使用方法 | ①、37℃水浴融化本培养基,乙醇消毒外表面后置超净台备用; 注:本品融化后出现少量白色絮状物属正常现象,静置3-5min使其沉至瓶底,然后吸取上清使用即可。 ②、针对状态良好的融合孔(比如孔内培养基颜色正常或轻微发黄、且显微镜下细胞状态良好、透亮、大小正常等)可直接使用黄枪头轻轻吹打融合孔,细胞计数后按0.8-1.5cell/孔/200ul培养基铺板。 ③、针对状态不太良好的融合孔(比如孔内培养基颜色酸化发黄或显微镜下细胞状态皱缩、发黑等)可选择两种方式进行后续亚克隆。 第一种方式是将融合孔细胞吸至装有1ml本培养基的24孔板内,在扩培后的第2-3天再行计数进行亚克隆铺板(0.8-1.5cell/孔/200ul培养基),此时融合孔细胞倍增的次数有限且细胞状态良好,非常适于亚克隆铺板; 第二种方式是使用黄枪头小心吸弃融合孔上清,每孔补充200ul新鲜的本培养基,至37度5% CO2静置培养3-4小时,然后取样细胞计数后进行亚克隆(0.8-1.5cell/孔/200ul培养基); 注:使用本司“杂交瘤扩培及亚克隆专用培养基”培养后的亚克隆一般使第6-8天即可开始下游检测筛选。 |